Analiza molekularna niedoboru syntetazy arginino bursztynianu w ludzkich fibroblastach.

Przeanalizowaliśmy hodowane fibroblasty skóry pochodzące od pacjentów z niedoborem syntetazy arginino-bursztynianu pod względem zmian w strukturze genu, zawartości mRNA i struktury białka. Genomowy DNA trawiono endonukleazami EcoRI lub Hindlll, a fragmenty analizowano metodą Southern blotting i hybrydyzację z sondą cDNA dla syntetazy arginino bursztynianu. Schemat blot jest złożony, ponieważ istnieje co najmniej 10 kopii genów podobnych do syntetazy arginino-bursztynianu rozproszonych na wielu ludzkich chromosomach. U wszystkich dziewięciu badanych pacjentów wykazano wzory fragmentów DNA, które były nieodróżnialne od normalnych kontrolnych linii komórkowych, i pomimo możliwości, że złożoność mogła maskować niektóre zmiany, główne delecje aktywnego genu (genów) nie były obecne. Hybrydyzacja RNA metodą hybrydyzacji wykazała obecność hybrydowalnego mRNA w przybliżeniu normalnej wielkości u siedmiu z siedmiu osobników badanych z sugestią pewnej niejednorodności. Analiza antygenu enzymu przez transfer białka z żeli poliakryloamidowych zawierających NaDodSO4 ujawniła znaczną niejednorodność. Analiza ta nie wykazała materiału reagującego krzyżowo (CRM) w dziewięciu liniach komórkowych, CRM o normalnej masie cząsteczkowej w jednej linii komórkowej i CRM o obniżonej masie cząsteczkowej w jednej linii komórkowej. Odkrycia te sugerują, że geny dla syntetazy argininobursztynianu u większości pacjentów z cytrulininemią są transkrybowane i wytwarzają stabilny mRNA. Te mRNA albo nie ulegają translacji, albo produkt translacji (enzym) ulega szybkiej degradacji lub jest immunologicznie niereaktywny. Uszkodzona ekspresja genu w tym zaburzeniu wydaje się obejmować nieprawidłowy mRNA, który może być zmieniony przez mutacje punktowe, mutacje przesunięcia ramki, delecje, insercje lub w szczególności przez nieprawidłowe przetwarzanie RNA.
[więcej w: ćwiczenia przy rwie kulszowej, szczepionka przeciw pneumokokom, powiększanie biustu kwasem hialuronowym ]
[hasła pokrewne: ćwiczenia przy rwie kulszowej, xenna cena, venlafaxinum ]