Synteza kwasu żółciowego w izolowanej, rozdrobnionej wątrobie królika

Eksperymenty te przeprowadzono w celu wykazania przydatności perfundowanej wątroby królika do badań nad metabolizmem kwasów żółciowych oraz w celu określenia enzymu ograniczającego szybkość syntezy kwasów żółciowych. Króliki karmiono półsyntetyczną dietą, z dodatkiem 1% kolestyraminy lub bez niej, w kontrolowanych warunkach. Pod koniec 2-5 tygodnia, wątroby usunięto i perfundowano przez 2,5 godziny, stosując różne prekursory znakowane izotopem 14C do pomiaru syntezy kwasu cholowego de novo. Wątroby następnie analizowano pod kątem cholesterolu, a żółć zebraną podczas perfuzji analizowano pod kątem cholesterolu i kwasów żółciowych. Kontrolna żółć zawierała średnio 0,34 mg glikocholanu, 7,4 mg glikodeoksycholanu i 0,06 mg cholesterolu. Read more „Synteza kwasu żółciowego w izolowanej, rozdrobnionej wątrobie królika”

Immunoheterogeniczność hormonu przytarczycznego w surowicy żylnej z hiperfunkcji przytarczyc

Immunoreaktywny hormon przytarczyczny (iPTH) w osoczu człowieka z nadczynnością przytarczyc składa się głównie z karboksylowych (COOH) – końcowych fragmentów tego hormonu. Chociaż uważa się, że te fragmenty powstają głównie lub wyłącznie z obwodowego metabolizmu nienaruszonego ludzkiego PTH {hPTH (1-84)} wydzielanego z gruczołu przytarczycznego, istnieje niezgodność co do źródła fragmentów iPTH in vivo. Aby ponownie zbadać to pytanie, frakcjonowaliśmy surowice krwi obwodowej i tarczycy lub żyły przytarczyc żylnych od czterech pacjentów z pierwotną nadczynnością przytarczyc przy użyciu systemu filtracji żelowej o wysokiej rozdzielczości (kolumny Bio-Gel P-150 prowadzone przez przepływ zwrotny). Ścieki z kolumny zanalizowano przy użyciu dwóch testów radioimmunologicznych PTH, jeden skierowany w kierunku regionu aminowego (NH2) – końcowy region cząsteczki, drugi w kierunku regionu końcowego COOH. We wszystkich czterech surowicach tarczycy lub paratyroidach pobierano żylne surowicy, iPTH był 9-180 razy większy niż w surowicy obwodowej od tego samego pacjenta; po frakcjonowaniu, hPTH (1-84) stanowiło tylko część całkowitego iPTH (35-55% z testem skierowanym w kierunku końca COOH regionu hPTH,> 90% z testem ukierunkowanym na koniec NH2). Read more „Immunoheterogeniczność hormonu przytarczycznego w surowicy żylnej z hiperfunkcji przytarczyc”

Paradoksalne działanie klofibratu na wątrobę i metabolizm mięśni u szczurów: INDUKCJA MYOTONII I ZMIANY KWASU TŁUSZCZOWEGO I UTLENIANIA GLUKOZY

Przewlekłe przyjmowanie klofibratu czasami powoduje zespół mięśniowy u człowieka. Zbadaliśmy wpływ przewlekłego podawania klofibratu u szczurów na aktywność elektryczną mięśnia szkieletowego (brzuchatego łydki), jego skład i utlenianie palmitynianu i glukozy. Efekty te zostały porównane z tymi w wątrobie. Clofibrate administration zmienił wzór elektromiograficzny mięśnia brzuchatego łydki (charakterystyka miotonii), zmniejszył zawartość białka i upośledził jego utlenianie palmitynianu i glukozy. Efekty te były zupełnie inne w wątrobie, ponieważ spożycie klofibratu zwiększało zawartość białka wątroby i utlenianie palmitynianu bez wpływu na utlenianie glukozy przez tę tkankę. Read more „Paradoksalne działanie klofibratu na wątrobę i metabolizm mięśni u szczurów: INDUKCJA MYOTONII I ZMIANY KWASU TŁUSZCZOWEGO I UTLENIANIA GLUKOZY”

Korekta wytwarzania interleukiny-2 u pacjentów z toczniem rumieniowatym układowym przez usunięcie spontanicznie aktywowanych komórek supresorowych.

Produkcja interleukiny-2 (IL-2) in vitro ulega depresji u chorych na toczeń rumieniowaty układowy (SLE). Nie wiadomo, czy ta nieprawidłowość jest spowodowana defektem w limfocytach producenta, czy też nadmierną supresją. Podajemy, że usunięcie komórek OKT8 (Leu 2a) + zwiększyło produkcję IL-2 przez stymulowane in vitro limfocyty do normalnego lub powyżej normalnego poziomu u 19 z 21 pacjentów z SLE. Ten wzrost był bardziej widoczny u pacjentów z klinicznie nieaktywną chorobą i / lub otrzymujących mniej niż 7,5 mg prednizonu. Usunięcie komórek OKT8 + z normalnych nie zwiększyło znacząco aktywności IL-2. Read more „Korekta wytwarzania interleukiny-2 u pacjentów z toczniem rumieniowatym układowym przez usunięcie spontanicznie aktywowanych komórek supresorowych.”

Badania nad prawidłową i przewlekłą chorobą ziarniniakową neutrofili wskazują na korelację tyrozynolowania tubuliny z komórkowym stanem redoks.

Specyficzna stymulacja tyrozynolowania tubuliny w ludzkich leukocytach polimorfojądrowych (PMN) jest indukowana syntetycznym peptydowym chemoatraktantem, N-formylo-metionylo-leucylo-fenyloalaniną (fMet-Leu-Phe), a ta stymulacja tyrozynolowania w PMN jest całkowicie hamowana w obecność różnych czynników redukujących. Dalsze badania mające na celu scharakteryzowanie mechanizmu stymulacji tyrozynolowania w PMN wykazały, że warunki hamujące wybuch oddechowy stymulują PMN, np. Atmosferę beztlenową lub dodatek przeciwutleniaczy, takich jak cysteamina, azydek lub kwas 2,3-dihydroksybenzoesowy, również hamowały wywołaną peptydem stymulację tyrozynolowania w tych komórkach. Ponadto odczynnik sulfhydrylowy, N-etylomaleimid, powodował obniżoną tyrozyna- nację w spoczynkowym PMN i całkowicie hamował indukowaną przez FMet-Leu-Phe stymulację. W przeciwieństwie do tego dodatek diamidu, który preferencyjnie utlenia glutation komórkowy, znacznie pobudził tyrozynaję zarówno w spoczynkowym, jak i stymulowanym fMet-Leu-Phe PMN. Read more „Badania nad prawidłową i przewlekłą chorobą ziarniniakową neutrofili wskazują na korelację tyrozynolowania tubuliny z komórkowym stanem redoks.”

Znacznie zahamowały aktywność 7-dehydrocholesterol-delta 7-reduktazy w mikrosomach wątroby z homozygotów Smitha-Lemli-Opitza.

Zbadaliśmy defekt enzymatyczny w biosyntezie późnego cholesterolu w zespole Smitha-Lemli-Opitza, recesywnie odziedziczonym zaburzeniu rozwojowym charakteryzującym się dysmorfizmem, upośledzeniem umysłowym i wrodzonymi anomaliami wielonarządowymi. Zmniejszone stężenie cholesterolu w osoczu i tkance z podwyższonymi stężeniami 7-dehydrocholesterolu to cechy biochemiczne diagnozujące odziedziczony defekt enzymu. Stosując testy wbudowywania izotopów, zmierzyliśmy transformację prekursorów, [3 alpha-3H] lathosterolu i [1,2-3H] 7-dehydrocholesterolu do cholesterolu przez mikrosomy wątroby z siedmiu kontroli i czterech homozygotycznych osobników Smith-Lemli-Opitz. Wprowadzenie podwójnego wiązania w lathosterolu w C-5 [6] w celu utworzenia 7-dehydrocholesterolu, który jest katalizowany przez 5-dehydrogenazę lathosterolu, było równie szybkie w kontrolnych i homozygotach mikrosomach wątrobowych (120 +/- 8 w porównaniu do 100 +/- 7). pmol / mg białka na minutę, P = NS). Read more „Znacznie zahamowały aktywność 7-dehydrocholesterol-delta 7-reduktazy w mikrosomach wątroby z homozygotów Smitha-Lemli-Opitza.”

Biosynteza prostacykliny w hodowlanym śródbłonku naczyniowym jest ograniczona przez dezaktywację cyklooksygenazy.

Pierwotne monowarstwowe hodowle ludzkiego śródbłonka żyły pępkowej wytwarzają prostacyklinę (PGI2) w odpowiedzi na stymulację przez trombinę, jonofor A23187, kwas arachidonowy i endoperoksyd prostaglandynowy, PGH2. Żadna z tych obróbek nie miała istotnego wpływu na zdolność śródbłonka do wytwarzania PGI2 w odpowiedzi na późniejszą stymulację przez PGH2. Przeciwnie, śródbłonek wstępnie eksponowany na trombinę, A23187 lub kwas arachidonowy wytwarzał odpowiednio około 37, 68 i 84% mniej PGI2, po kolejnej stymulacji kwasem arachidonowym. Odkrycia te sugerują, że biosynteza PGI2 w hodowlanym śródbłonku powoduje dezaktywację cyklooksygenazy-hydroperoksydazy, ale nie syntezy PGI2. Aby przetestować hipotezę, że sama biosynteza PGI2 powoduje dezaktywację cyklooksygenazy, trombinę, A23187 i kwas arachidonowy dodano do monowarstw, które zostały wstępnie inkubowane z ibuprofenem (250 mikroM), szybko odwracalnym, konkurencyjnym inhibitorem tego enzymu. Read more „Biosynteza prostacykliny w hodowlanym śródbłonku naczyniowym jest ograniczona przez dezaktywację cyklooksygenazy.”

Mitochondrialny stres oksydacyjny po niedotlenieniu tlenku węgla w mózgu szczura.

Aby lepiej zrozumieć mechanizmy uszkodzenia tkanki podczas i po niedotlenieniu tlenku węgla (CO), badaliśmy wytwarzanie częściowo zredukowanego gatunku tlenu (PROS) w mózgach szczurów poddanych 1% CO przez 30 minut, a następnie ponownie natleniano w powietrzu dla 0-180 min. Przez określenie zależnej od H2O2 inaktywacji katalazy w obecności 3-amino-1,2,4-triazolu (ATZ), stwierdziliśmy zwiększoną produkcję H2O2 w przodomózgowiu po reoksygenacji. Lokalizacja katalazy w mikroperoksizomach mózgu wskazała na wewnątrzkomórkowe miejsce wytwarzania H2O2; późniejsze badania mitochondriów przodomózgowia izolowane podczas i po niedotlenieniu CO wiązały się z pobliskimi mitochondriami jako źródłem H2O2. W mitochondriach dwa okresy wytwarzania PROS były wskazywane przez zmniejszenie stosunku zredukowanego do utlenionego glutationu (GSH / GSSG). Te okresy stresu oksydacyjnego następowały bezpośrednio po ekspozycji na CO i 120 min po reoksygenacji, jak wskazano odpowiednio 50 i 43% spadkiem w GSH / GSSG. Read more „Mitochondrialny stres oksydacyjny po niedotlenieniu tlenku węgla w mózgu szczura.”

Odpowiedź enzymu trzustkowego na płynny posiłek i stymulację hormonalną. Korelacja z poziomami sekretyny i cholecystokininy w osoczu.

Wytwarzanie trypsyny w trzustce i poziomy sekretiny w osoczu i cholecystokininy (CCK) zmierzono u pięciu zdrowych ochotników w celu zbadania mechanizmów zaangażowanych w regulację poposiłkowego wydzielania trzustkowego. Trzustka była stymulowana płynnym posiłkiem testowym lub przez dożylną sekretynę (1-82 pmol / kg-1 na h-1) lub caeruleinę, analog CCK (2,3-37 pmol / kg-1 na h-1), lub przez połączenie sekretyny i caeruleiny. Wydzielanie trzustki oceniano techniką perfuzji markera (glikol polietylenowy [PEG 4000]), sekretyny osocza i CCK za pomocą specyficznych testów radioimmunologicznych. Zwiększenie dawek sekretyny powodowało zwiększenie wydajności wodorowęglanów (P mniejsze niż 0,01), podczas gdy trypsyna nie była stymulowana ponad poziom podstawowy. Klasyfikowana kaeruleina powodowała skokowy wzrost wydajności trypsyny i wodorowęglanu (P poniżej 0,01). Read more „Odpowiedź enzymu trzustkowego na płynny posiłek i stymulację hormonalną. Korelacja z poziomami sekretyny i cholecystokininy w osoczu.”

Wzór genetycznej transmisji defektu leukocytów w śmiertelnej ziarniniakowej chorobie dzieciństwa

Test czynnościowy leukocytów-fagocytów, który okazał się nieprawidłowy u chłopców z śmiertelną ziarniniakową chorobą wieku dziecięcego, okazał się nieprawidłowy w stopniu pośrednim u ich matek. Dziewięć z dziewięciu matek okazało się nienormalnych, podczas gdy żaden z ośmiu ojców i żaden z pięciu zdrowych braci nie wykazywał wady. 10 z 16 rodzeństwa było anormalnych w takim samym stopniu jak ich matki, podobnie jak wszystkie trzy babcie ze strony matki, które były dostępne do nauki. Zakładając, że ten pośredni defekt funkcjonalny reprezentuje stan heterozygotyczny, dziewięć rodowodów rodzinnych jest całkowicie zgodnych z koncepcją, że cecha jest przenoszona na chromosomie X. Test histochemiczny barwnika-fagocytozy tetrazolium był również nieprawidłowy u samic-nosicieli i zapewnił niezależne potwierdzenie selekcji rodzeństwa, podejrzewanego o bycie nosicielem tej cechy. Read more „Wzór genetycznej transmisji defektu leukocytów w śmiertelnej ziarniniakowej chorobie dzieciństwa”