Analiza molekularna niedoboru syntetazy arginino bursztynianu w ludzkich fibroblastach.

Przeanalizowaliśmy hodowane fibroblasty skóry pochodzące od pacjentów z niedoborem syntetazy arginino-bursztynianu pod względem zmian w strukturze genu, zawartości mRNA i struktury białka. Genomowy DNA trawiono endonukleazami EcoRI lub Hindlll, a fragmenty analizowano metodą Southern blotting i hybrydyzację z sondą cDNA dla syntetazy arginino bursztynianu. Schemat blot jest złożony, ponieważ istnieje co najmniej 10 kopii genów podobnych do syntetazy arginino-bursztynianu rozproszonych na wielu ludzkich chromosomach. U wszystkich dziewięciu badanych pacjentów wykazano wzory fragmentów DNA, które były nieodróżnialne od normalnych kontrolnych linii komórkowych, i pomimo możliwości, że złożoność mogła maskować niektóre zmiany, główne delecje aktywnego genu (genów) nie były obecne. Hybrydyzacja RNA metodą hybrydyzacji wykazała obecność hybrydowalnego mRNA w przybliżeniu normalnej wielkości u siedmiu z siedmiu osobników badanych z sugestią pewnej niejednorodności. Read more „Analiza molekularna niedoboru syntetazy arginino bursztynianu w ludzkich fibroblastach.”

Rola utleniaczy w uszkodzeniu DNA. Rodnik hydroksylowy pośredniczy w synergicznym oddziaływaniu DNA na azbest i dym papierosowy.

Mechanizm, który powoduje, że palenie papierosów i narażenie na działanie azbestu zwiększa synergetycznie częstość występowania raka płuc, jest nieznany. Postawiliśmy hipotezę, że dym papierosowy i azbest mogą synergistycznie zwiększać uszkodzenia DNA. Aby przetestować tę hipotezę, odsłoniliśmy izolowane DNA bakteriofaga PM2 do dymu papierosowego i / lub azbestu i oceniliśmy pęknięcie nici DNA jako wskaźnik uszkodzeń DNA. Nasze wyniki potwierdziły naszą hipotezę. 78 +/- 12% DNA eksponowanego na dym papierosowy i azbest powodowało pęknięcia nici, podczas gdy tylko 9,8 +/- 7,0 lub 4,3 +/- 3,3% DNA narażonego na dym papierosowy lub azbest odpowiednio rozwinęło pęknięcia nici pod warunki eksperymentu. Read more „Rola utleniaczy w uszkodzeniu DNA. Rodnik hydroksylowy pośredniczy w synergicznym oddziaływaniu DNA na azbest i dym papierosowy.”

Dynamika wyrzutu lewej komory w obstrukcyjnej i bezobjawowej przerostowej kardiomiopatii.

Celem tego badania było zbadanie dynamiki wyrzutu lewej komory u pacjentów z obturacyjną i bezobjawową kardiomiopatią przerostową (HCM). Podczas cewnikowania serca badano 30 pacjentów z HCM i 29 pacjentów bez objawów choroby sercowo-naczyniowej. Za pomocą pojedynczego cewnika wielosensorowego, uzyskaną elektromagnetycznie wstępną prędkość przepływu aorty i wysoką dokładność ciśnienia lewej komory i aorty odnotowano podczas odpoczynku (n = 47) i prowokacyjnych manewrów (n = 23). Dynamiczne opróżnianie komór podczas odpoczynku również analizowano za pomocą angiografii klatka po klatce (n = 46). Wypływ lewej komory niezależnie pochodził zarówno z prędkości przepływu, jak i technik angiograficznych. Read more „Dynamika wyrzutu lewej komory w obstrukcyjnej i bezobjawowej przerostowej kardiomiopatii.”

Rozwój przeciwciał monoklonalnych przeciwko mucynie okrężnicy. Charakterystyka wielu gatunków mucynów okrężnicy.

Strukturalne związki między komórkami mucynowymi okrężnicy oceniano za pomocą biblioteki przeciwciał monoklonalnych (Mab) skierowanych przeciwko oczyszczonej ludzkiej mucynie okrężnicy (HCM). Po immunizacji myszy oczyszczoną mucyną z prawidłowej ludzkiej błony śluzowej okrężnicy, 14% z 1920 poddanych badaniu produktów fuzji było dodatnich pod względem aktywności anty-HCM w teście na fazie stałej. Wzorce selektywnego wiązania przez hybrydoma sześciu odrębnych gatunków HCM (I-VI) oddzielonych chromatografią DEAE-celulozową sugerowały obecność zarówno uwarunkowanych, jak i gatunkowych determinant antygenowych wśród HCM gatunków I-VI. 23 MAbs anty-HCM (7 IgM, 7 IgG1 i 9 IgG2) wykazujące różnorodność swoistości dla gatunku anty-HCM, zostały wytworzone i wykorzystane do zbadania strukturalnych związków między gatunkami mucyny. Wiązanie różnych mucyn poprzez indywidualne MAbs anty-HCM wykazano za pomocą konkurencyjnego testu radioimmunologicznego w fazie stałej dla odzwierciedlenia obecności identycznych epitopów na różnych gatunkach. Read more „Rozwój przeciwciał monoklonalnych przeciwko mucynie okrężnicy. Charakterystyka wielu gatunków mucynów okrężnicy.”

Odpowiedź enzymu trzustkowego na płynny posiłek i stymulację hormonalną. Korelacja z poziomami sekretyny i cholecystokininy w osoczu.

Wytwarzanie trypsyny w trzustce i poziomy sekretiny w osoczu i cholecystokininy (CCK) zmierzono u pięciu zdrowych ochotników w celu zbadania mechanizmów zaangażowanych w regulację poposiłkowego wydzielania trzustkowego. Trzustka była stymulowana płynnym posiłkiem testowym lub przez dożylną sekretynę (1-82 pmol / kg-1 na h-1) lub caeruleinę, analog CCK (2,3-37 pmol / kg-1 na h-1), lub przez połączenie sekretyny i caeruleiny. Wydzielanie trzustki oceniano techniką perfuzji markera (glikol polietylenowy [PEG 4000]), sekretyny osocza i CCK za pomocą specyficznych testów radioimmunologicznych. Zwiększenie dawek sekretyny powodowało zwiększenie wydajności wodorowęglanów (P mniejsze niż 0,01), podczas gdy trypsyna nie była stymulowana ponad poziom podstawowy. Klasyfikowana kaeruleina powodowała skokowy wzrost wydajności trypsyny i wodorowęglanu (P poniżej 0,01). Read more „Odpowiedź enzymu trzustkowego na płynny posiłek i stymulację hormonalną. Korelacja z poziomami sekretyny i cholecystokininy w osoczu.”

Hamowanie transportu penicyliny z płynu mózgowo-rdzeniowego po wewnątrzszczepiennym zaszczepieniu bakterii

Wpływ wewnątrzcząsteczkowej inokulacji bakterii na układ splotu naczyniówkowego, który transportuje penicylinę z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) do krwi, badano in vitro i in vivo. Zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych i splotu naczyniówkowego, jak również pleocytoza z CSF indukowano u królików inwazyjnymi dożylnie Hemophilus influenzae lub Staphylococcus aureus. W różnych czasach po inokulacji bakteryjnej, splot naczyniówki zaszczepionych królików usunięto i inkubowano w sztucznym CSF zawierającym penicylinę [14C]. Zdolność splotów naczyniówkowych do akumulacji pencyliny in vitro została zmierzona i stwierdzono jej obniżenie w porównaniu z kontrolą. To obniżenie wychwytu splotu naczyniówkowego odwróciło się wraz z ustąpieniem procesu zapalnego. Read more „Hamowanie transportu penicyliny z płynu mózgowo-rdzeniowego po wewnątrzszczepiennym zaszczepieniu bakterii”

Zawartość receptora androgenowego w normalnej i hiperplastycznej psiej prostacie

Opracowano procedurę pomiaru receptorów androgenowych w cytoplazmatycznych ekstraktach z gruczołów od nienaruszonych psów. Protokół wykorzystywał analizę saturacji wymiany w 15 ° C z użyciem syntetycznego androgenowego R1881 (17 (3-hydroksy-17P-metyrystra-4,9,11-trien-3-onu) jako sondy ligandu i ilościowo wykrytego całkowitego cytoplazmatycznego receptora androgenu ( Rc, receptor pozbawiony androgenów i RcA, receptor zajętości androgenu) obecny na początku testu. Protokół ten zastosowano w połączeniu z procedurą analizy saturacji tkanki (do ilościowego oznaczenia jądrowego receptora androgenowego) w celu ilościowego oznaczenia całkowitej zawartości receptora androgenowego w prawidłowych i rozrostowych gruczołach krokowych uzyskanych od młodego (w wieku 2,5- lub 4,6-latka) i wieku (12,5-latka). stare) rasowe psy o znanej randze. Całkowita zawartość cytoplazmatycznego receptora androgenu (pikomoli na prostatę) w hiperplastycznych gruczołach krokowych była 4,6-krotnie większa niż w prawidłowych prostatach. Read more „Zawartość receptora androgenowego w normalnej i hiperplastycznej psiej prostacie”

Znacznie zahamowały aktywność 7-dehydrocholesterol-delta 7-reduktazy w mikrosomach wątroby z homozygotów Smitha-Lemli-Opitza.

Zbadaliśmy defekt enzymatyczny w biosyntezie późnego cholesterolu w zespole Smitha-Lemli-Opitza, recesywnie odziedziczonym zaburzeniu rozwojowym charakteryzującym się dysmorfizmem, upośledzeniem umysłowym i wrodzonymi anomaliami wielonarządowymi. Zmniejszone stężenie cholesterolu w osoczu i tkance z podwyższonymi stężeniami 7-dehydrocholesterolu to cechy biochemiczne diagnozujące odziedziczony defekt enzymu. Stosując testy wbudowywania izotopów, zmierzyliśmy transformację prekursorów, [3 alpha-3H] lathosterolu i [1,2-3H] 7-dehydrocholesterolu do cholesterolu przez mikrosomy wątroby z siedmiu kontroli i czterech homozygotycznych osobników Smith-Lemli-Opitz. Wprowadzenie podwójnego wiązania w lathosterolu w C-5 [6] w celu utworzenia 7-dehydrocholesterolu, który jest katalizowany przez 5-dehydrogenazę lathosterolu, było równie szybkie w kontrolnych i homozygotach mikrosomach wątrobowych (120 +/- 8 w porównaniu do 100 +/- 7). pmol / mg białka na minutę, P = NS). Read more „Znacznie zahamowały aktywność 7-dehydrocholesterol-delta 7-reduktazy w mikrosomach wątroby z homozygotów Smitha-Lemli-Opitza.”

Specjalna terapia cytokinami narządowymi. Lokalna aktywacja fagocytów jednojądrzastych poprzez dostarczanie aerozolu rekombinowanego interferonu gamma do płuc człowieka.

W kontekście centralnej roli makrofagów pęcherzyków płucnych w obronie powierzchni nabłonkowej układu oddechowego oraz zdolności IFN-gamma do aktywacji fagocytów jednojądrzastych, ocenialiśmy strategie wykorzystania rIFN-gamma do aktywacji ludzkich makrofagów pęcherzyków płucnych in vivo. Aby to osiągnąć, rIFN-gamma podawano niepalącym normalom, ilości ilościowe IFN-gamma w surowicy i płynie nabłonka oddechowego (ELF) i status związanej z IFN-gamma aktywacji monocytów krwi i makrofagów pęcherzykowych oceniano przez ekspresja transkryptów mRNA IP-10, genu indukowanego specyficznie przez IFN-gamma. Po podaniu ogólnoustrojowym (podskórnie) maksymalnie tolerowanych ilości rIFN-gamma (250 mikrogramów) wykryto poziomy IFN-gamma w surowicy, ale nie ELF, ekspresję transkryptów IP-10 w monocytach krwi, ale nie makrofagów pęcherzykowych i wiele układowych niekorzystne skutki. Aby obejść niezdolność podawania ogólnoustrojowego do osiągnięcia wydolności oddechowej ELF i aktywować makrofagi pęcherzykowe, rIFN-gamma (250-1 000 mikrogramów) wdychano w postaci aerozolu raz dziennie przez 3 dni. Co uderzające, podczas gdy IFN-gamma nie wykryto w surowicy, było wykrywalne w oddechowym ELF w sposób zależny od dawki. Read more „Specjalna terapia cytokinami narządowymi. Lokalna aktywacja fagocytów jednojądrzastych poprzez dostarczanie aerozolu rekombinowanego interferonu gamma do płuc człowieka.”

Metabolizm pantetiny w cystynozie.

D-Pantethine jest koniugatem witaminy z kwasem pantotenowym i niskocząsteczkowej cysteaminy aminotiolowej. Pantetryna jest eksperymentalnym środkiem hipolipemicznym i została zasugerowana jako źródło cysteaminy w leczeniu cystynozy nefropatycznej. Leczymy cztery cystinotyczne dzieci 70-1 000 mg / kg na d-pantetynę doustną i badamy jej metabolizm. Pantetynę szybko hydrolizowano do kwasu pantotenowego i cysteaminy; nie mogliśmy wykryć pantetiny w osoczu po podaniu doustnym. Odpowiedzialny enzym, pantetheinazy , był bardzo aktywny w homogenatach błony śluzowej jelita cienkiego i osocza. Read more „Metabolizm pantetiny w cystynozie.”