Analiza molekularna niedoboru syntetazy arginino bursztynianu w ludzkich fibroblastach.

Przeanalizowaliśmy hodowane fibroblasty skóry pochodzące od pacjentów z niedoborem syntetazy arginino-bursztynianu pod względem zmian w strukturze genu, zawartości mRNA i struktury białka. Genomowy DNA trawiono endonukleazami EcoRI lub Hindlll, a fragmenty analizowano metodą Southern blotting i hybrydyzację z sondą cDNA dla syntetazy arginino bursztynianu. Schemat blot jest złożony, ponieważ istnieje co najmniej 10 kopii genów podobnych do syntetazy arginino-bursztynianu rozproszonych na wielu ludzkich chromosomach. U wszystkich dziewięciu badanych pacjentów wykazano wzory fragmentów DNA, które były nieodróżnialne od normalnych kontrolnych linii komórkowych, i pomimo możliwości, że złożoność mogła maskować niektóre zmiany, główne delecje aktywnego genu (genów) nie były obecne. Hybrydyzacja RNA metodą hybrydyzacji wykazała obecność hybrydowalnego mRNA w przybliżeniu normalnej wielkości u siedmiu z siedmiu osobników badanych z sugestią pewnej niejednorodności. Read more „Analiza molekularna niedoboru syntetazy arginino bursztynianu w ludzkich fibroblastach.”

Dziedziczna zmiana molekularna kinazy pirogronianowej erytrocytów: Identyfikacja kinetycznie nieprawidłowego izozymy związanego z przedwczesną hemolizą

Obserwowano nietypowe przypadki dziedzicznej niedokrwistości hemolitycznej, które są zgodne klinicznie i biochemicznie z niedokrwistością typu niedoboru pirograwitazy (PK), z wyjątkiem obecności widocznie odpowiednich ilości aktywności PK erytrocytów za pomocą zwykłej procedury oznaczania. Przedstawiono badania czterech takich anomalnych przypadków, występujących w dwóch niepowiązanych rodzinach. Erytrocyty zawierały kinetycznie nieprawidłowy izozym kinazy pirogronianowej (PK2). Stałe Michaelisa dla patologicznego izozymu względem fosfoenolopirogronianu były ponad 10-krotnie większe niż wartości kontrolne, ale nie zaobserwowano żadnych nieprawidłowości kinetycznych dla drugiego substratu, difosforanu adenozyny. PK2 wykazywał optimum pH prawie U niższe niż postać dzikiego enzymu (PK1). Read more „Dziedziczna zmiana molekularna kinazy pirogronianowej erytrocytów: Identyfikacja kinetycznie nieprawidłowego izozymy związanego z przedwczesną hemolizą”

Dynamika wyrzutu lewej komory w obstrukcyjnej i bezobjawowej przerostowej kardiomiopatii.

Celem tego badania było zbadanie dynamiki wyrzutu lewej komory u pacjentów z obturacyjną i bezobjawową kardiomiopatią przerostową (HCM). Podczas cewnikowania serca badano 30 pacjentów z HCM i 29 pacjentów bez objawów choroby sercowo-naczyniowej. Za pomocą pojedynczego cewnika wielosensorowego, uzyskaną elektromagnetycznie wstępną prędkość przepływu aorty i wysoką dokładność ciśnienia lewej komory i aorty odnotowano podczas odpoczynku (n = 47) i prowokacyjnych manewrów (n = 23). Dynamiczne opróżnianie komór podczas odpoczynku również analizowano za pomocą angiografii klatka po klatce (n = 46). Wypływ lewej komory niezależnie pochodził zarówno z prędkości przepływu, jak i technik angiograficznych. Read more „Dynamika wyrzutu lewej komory w obstrukcyjnej i bezobjawowej przerostowej kardiomiopatii.”

Rozwój przeciwciał monoklonalnych przeciwko mucynie okrężnicy. Charakterystyka wielu gatunków mucynów okrężnicy.

Strukturalne związki między komórkami mucynowymi okrężnicy oceniano za pomocą biblioteki przeciwciał monoklonalnych (Mab) skierowanych przeciwko oczyszczonej ludzkiej mucynie okrężnicy (HCM). Po immunizacji myszy oczyszczoną mucyną z prawidłowej ludzkiej błony śluzowej okrężnicy, 14% z 1920 poddanych badaniu produktów fuzji było dodatnich pod względem aktywności anty-HCM w teście na fazie stałej. Wzorce selektywnego wiązania przez hybrydoma sześciu odrębnych gatunków HCM (I-VI) oddzielonych chromatografią DEAE-celulozową sugerowały obecność zarówno uwarunkowanych, jak i gatunkowych determinant antygenowych wśród HCM gatunków I-VI. 23 MAbs anty-HCM (7 IgM, 7 IgG1 i 9 IgG2) wykazujące różnorodność swoistości dla gatunku anty-HCM, zostały wytworzone i wykorzystane do zbadania strukturalnych związków między gatunkami mucyny. Wiązanie różnych mucyn poprzez indywidualne MAbs anty-HCM wykazano za pomocą konkurencyjnego testu radioimmunologicznego w fazie stałej dla odzwierciedlenia obecności identycznych epitopów na różnych gatunkach. Read more „Rozwój przeciwciał monoklonalnych przeciwko mucynie okrężnicy. Charakterystyka wielu gatunków mucynów okrężnicy.”

Szczur jelitowy Sekrety Tarczowe lipoproteiny o dużej gęstości

Lipoproteiny o wysokiej gęstości wyizolowano z połączonej surowicy szczurzej i krezkowej limfy szczurów przetoki limfatycznej. W większości eksperymentów podczas gromadzenia limfy dodano kwas 5,5 (3-ditiionitrobenzoesowy, inhibitor enzymu acylotransferazy lecytyna: cholesterol, aby zapobiec modyfikacji składu lipidów nowo wydzielanych lipoprotein. W wyniku negatywnego barwienia mikroskopu elektronowego lipoprotein o dużej gęstości limfatycznej odkryto cząstki dyskoidalne (190. 3 x 55. 1.), Które miały tendencję do tworzenia rouleaux, występowały również mniejsze sferyczne cząstki. Read more „Szczur jelitowy Sekrety Tarczowe lipoproteiny o dużej gęstości”

Hamowanie transportu penicyliny z płynu mózgowo-rdzeniowego po wewnątrzszczepiennym zaszczepieniu bakterii

Wpływ wewnątrzcząsteczkowej inokulacji bakterii na układ splotu naczyniówkowego, który transportuje penicylinę z płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) do krwi, badano in vitro i in vivo. Zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych i splotu naczyniówkowego, jak również pleocytoza z CSF indukowano u królików inwazyjnymi dożylnie Hemophilus influenzae lub Staphylococcus aureus. W różnych czasach po inokulacji bakteryjnej, splot naczyniówki zaszczepionych królików usunięto i inkubowano w sztucznym CSF zawierającym penicylinę [14C]. Zdolność splotów naczyniówkowych do akumulacji pencyliny in vitro została zmierzona i stwierdzono jej obniżenie w porównaniu z kontrolą. To obniżenie wychwytu splotu naczyniówkowego odwróciło się wraz z ustąpieniem procesu zapalnego. Read more „Hamowanie transportu penicyliny z płynu mózgowo-rdzeniowego po wewnątrzszczepiennym zaszczepieniu bakterii”

Zawartość receptora androgenowego w normalnej i hiperplastycznej psiej prostacie

Opracowano procedurę pomiaru receptorów androgenowych w cytoplazmatycznych ekstraktach z gruczołów od nienaruszonych psów. Protokół wykorzystywał analizę saturacji wymiany w 15 ° C z użyciem syntetycznego androgenowego R1881 (17 (3-hydroksy-17P-metyrystra-4,9,11-trien-3-onu) jako sondy ligandu i ilościowo wykrytego całkowitego cytoplazmatycznego receptora androgenu ( Rc, receptor pozbawiony androgenów i RcA, receptor zajętości androgenu) obecny na początku testu. Protokół ten zastosowano w połączeniu z procedurą analizy saturacji tkanki (do ilościowego oznaczenia jądrowego receptora androgenowego) w celu ilościowego oznaczenia całkowitej zawartości receptora androgenowego w prawidłowych i rozrostowych gruczołach krokowych uzyskanych od młodego (w wieku 2,5- lub 4,6-latka) i wieku (12,5-latka). stare) rasowe psy o znanej randze. Całkowita zawartość cytoplazmatycznego receptora androgenu (pikomoli na prostatę) w hiperplastycznych gruczołach krokowych była 4,6-krotnie większa niż w prawidłowych prostatach. Read more „Zawartość receptora androgenowego w normalnej i hiperplastycznej psiej prostacie”

Wpływ katecholamin, ćwiczeń i nitrogliceryny na prawidłowe i niedokrwienne miokardium u świadomych psów

Wpływ izoproterenolu, norepinefryny, dobutaminy, aktywności fizycznej i nitrogliceryny na średnicę, ciśnienie, szybkość skurczu, dP / dt, dP / dt / P, ciśnienie tętnicze, przepływ krwi wieńcowej z lewej strony i opór naczyń wieńcowych badano w zdrowe przytomne psy z prawidłową perfuzją wieńcową i tymi samymi zwierzętami po umiarkowanym globalnym niedokrwieniu wywołano częściową niedrożnością lewej głównej tętnicy wieńcowej. W normalnym sercu bez niedokrwienia wszystkie interwencje poprawiły wydajność lewej komory, o czym świadczyły wzrosty dP / dt / P i prędkości przy tej samej lub dolnej lewej końcoworozmiarowej średnicy lewej komory. Interwencje, które w normalnym sercu powodowały duży wzrost częstości akcji serca i kurczliwości mięśnia sercowego, np. Izoproterenol i ćwiczenia, lub które obniżały ciśnienie perfuzji wieńcowej, np. Nitroglicerynę lub izoproterenol, wywoływały paradoksalne reakcje w umiarkowanym globalnym niedokrwieniu, tj. Read more „Wpływ katecholamin, ćwiczeń i nitrogliceryny na prawidłowe i niedokrwienne miokardium u świadomych psów”

Specjalna terapia cytokinami narządowymi. Lokalna aktywacja fagocytów jednojądrzastych poprzez dostarczanie aerozolu rekombinowanego interferonu gamma do płuc człowieka.

W kontekście centralnej roli makrofagów pęcherzyków płucnych w obronie powierzchni nabłonkowej układu oddechowego oraz zdolności IFN-gamma do aktywacji fagocytów jednojądrzastych, ocenialiśmy strategie wykorzystania rIFN-gamma do aktywacji ludzkich makrofagów pęcherzyków płucnych in vivo. Aby to osiągnąć, rIFN-gamma podawano niepalącym normalom, ilości ilościowe IFN-gamma w surowicy i płynie nabłonka oddechowego (ELF) i status związanej z IFN-gamma aktywacji monocytów krwi i makrofagów pęcherzykowych oceniano przez ekspresja transkryptów mRNA IP-10, genu indukowanego specyficznie przez IFN-gamma. Po podaniu ogólnoustrojowym (podskórnie) maksymalnie tolerowanych ilości rIFN-gamma (250 mikrogramów) wykryto poziomy IFN-gamma w surowicy, ale nie ELF, ekspresję transkryptów IP-10 w monocytach krwi, ale nie makrofagów pęcherzykowych i wiele układowych niekorzystne skutki. Aby obejść niezdolność podawania ogólnoustrojowego do osiągnięcia wydolności oddechowej ELF i aktywować makrofagi pęcherzykowe, rIFN-gamma (250-1 000 mikrogramów) wdychano w postaci aerozolu raz dziennie przez 3 dni. Co uderzające, podczas gdy IFN-gamma nie wykryto w surowicy, było wykrywalne w oddechowym ELF w sposób zależny od dawki. Read more „Specjalna terapia cytokinami narządowymi. Lokalna aktywacja fagocytów jednojądrzastych poprzez dostarczanie aerozolu rekombinowanego interferonu gamma do płuc człowieka.”

Metabolizm pantetiny w cystynozie.

D-Pantethine jest koniugatem witaminy z kwasem pantotenowym i niskocząsteczkowej cysteaminy aminotiolowej. Pantetryna jest eksperymentalnym środkiem hipolipemicznym i została zasugerowana jako źródło cysteaminy w leczeniu cystynozy nefropatycznej. Leczymy cztery cystinotyczne dzieci 70-1 000 mg / kg na d-pantetynę doustną i badamy jej metabolizm. Pantetynę szybko hydrolizowano do kwasu pantotenowego i cysteaminy; nie mogliśmy wykryć pantetiny w osoczu po podaniu doustnym. Odpowiedzialny enzym, pantetheinazy , był bardzo aktywny w homogenatach błony śluzowej jelita cienkiego i osocza. Read more „Metabolizm pantetiny w cystynozie.”